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Mesure du calcium
dans les échantillons biologiques
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Un certain nombre de méthodes ont été décrites pour la mesure de
calcium dans les matériaux biologiques par
photométrie de flamme ou titrage.

 

Cette méthode utilise l'acide trichloroacétique (TCA)
pour précipiter les protéines et s'est avéré être
adéquat pour extraire tout le calcium des échantillons de tissus.  Le sodium, le potassium et le phosphate n'ont causé aucune interférence significative et la concentration de calcium dans la plage de 0 à 2 µg/ml est facilement déterminée._cc781905-5cde- 3194-bb3b-136bad5cf58d_
 

Solutions

De l'eau distillée désionisée est utilisée partout. Diluting Solutions est composé de 500 ml d'alcool isopropylique, 300 ml d'eau déionisée, 0,2 ml de non-Ion-Ox (Aloe Scientific Co, St. Louis, Mo.), 74,6 mg de KCl et 292 mg de NaCl. La solution d'acide trichloroacétique est à 6,2 % p/v pour l'extraction de tissus.  

 

Procédure    

Des échantillons de tissus ont été préparés et soigneusement buvardés sur du papier filtre, puis pesés avec précision pour donner des échantillons d'un poids humide de l'ordre de 100 mg. 136bad5cf58d_ 

 

L'échantillon est transféré dans un petit tube à centrifuger et suffisamment de solutions de TCA à 6,2 % sont ajoutées pour amener le volume à 2 ml. Le tube est bien couvert et vigoureusement secoué trois fois sur une période de trente minutes.

 

Un volume de 8 ml de fluide de dilution est ajouté au tube de la centrifugeuse et le tube est centrifugé. La solution de surnageant peut être analysée directement sans autre dilution. 

 

Lors de la mesure d'échantillons, un test initial pour estimer la plage de concentration de calcium via un étalonnage en un seul point de 100 ppm doit être effectué. Avec la valeur estimée de la concentration de l'échantillon, les étalons doivent alors être constitués d'au moins 4 étalons couvrant ± 50 ppm à partir de la valeur indicative approximative de l'échantillon.

 

Lors de la production de solutions standard, il est d'une importance vitale qu'elles soient diluées dans la solution de dilution et la solution de dilution doit être analysée comme un blanc afin que le photomètre à flamme prenne en compte les interférences chimiques dans la matrice ainsi que l'influence de l'alcool isopropylique présent dans la flamme.

 

Il a été constaté que les concentrations physiologiques normales de sodium, de potassium et de phosphate ne provoquaient pas d'interférences significatives. Cependant, les méthodes de réduction des interférences chimiques trouvées à partir de celles-ci pourraient être évitées par des méthodes utilisant l'EDTA, trouvées dans Measurement of Calcium in Serum et Urine. L'interférence du phosphate peut également être réduite en augmentant la température de la flamme et des méthodes ont été proposées pour ajouter des traces de lanthane et de strontium, mais la mesure dans laquelle l'interférence est réduite n'est pas actuellement quantifiée.

1Geyer, Robert & Bowie, E.'La microdétermination directe du calcium tissulaire
par Flame Photometry', Anal Biochem, 2, (1961), p. 360-369.

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