top of page

Mesure du calcium
dans l'ADN et DNP 
1

La teneur en calcium de l'eau
les solutions d'acide désoxyribonucléique (ADN) et de désoxyribonucléoprotéine (DNP) ne peuvent pas être dosées directement en raison d'effets d'interférence.

 

Une procédure d'extraction acide permettra des mesures directes du calcium dans l'ADN et le DNP, ou une technique d'addition standard est utilisée à des concentrations plus élevées.     

Procédure
De l'eau distillée déionisée est utilisée partout. La verrerie est nettoyée à l'acide et rincée abondamment dans de l'eau déionisée avant utilisation pour éviter toute contamination.  

 

Extraction à l'acide

Les extraits acides sont préparés en ajoutant 1 volume de HCl 1 M à 19 volumes de solution d'échantillon contenant de l'ADN ou du DNP dans de l'eau, et laissés reposer à 700°C pendant une nuit.  Lorsqu'une suspension est présente, l'échantillon est centrifugé à 2000G pendant 10 minutes pour obtenir la fraction soluble. Environ 99 % de l'ADN et environ 80 % de la protéine deviennent solubles dans HCl après une nuit de repos dans HCl. La concentration d'ADN de DNP est d'environ 40 % p/p. 

 

La solution d'échantillon doit avoir une concentration d'ADN entre 50 ppm et 100 ppm d'ADN. Par conséquent, il convient de noter que les lectures peuvent entraîner un manque de stabilité si les concentrations d'ions sont présentes à plus de 100 ppm. Bien que le photomètre à flamme soit capable de détecter des lectures d'ions supérieures à 100 ppm, il n'est pas recommandé. Cela est dû à la matière qui peut se déposer dans le nébuliseur et effectuer d'autres mesures par les gouttelettes partant lors d'autres mesures. Cela signifie que la fréquence de nettoyage du nébuliseur est augmentée et qu'une dilution supplémentaire de l'échantillon est recommandée.

 

Technique d'addition standard

La technique d'addition standard est un moyen d'estimer la concentration dans une solution où des métaux interférents sont également connus pour être présents. 

 

La technique mesure la récupération de quantités connues ajoutées à la concentration inconnue de la solution. Les solutions d'échantillon sont préparées en ajoutant 1 ou 2 ml aliquots de solution d'échantillon à une solution étalon de calcium. 

 

La concentration en calcium de la solution d'échantillon d'origine est calculée en traçant la concentration de la solution standard et la solution standard plus l'échantillon ; la différence moins le blanc HCl pour chaque courbe tracée sera la concentration de la solution inconnue.

 

Préparation du graphique standard

Réglez le photomètre de flamme conformément à l'étalonnage multipoint/un seul ion figurant à la page 24 du manuel d'installation et d'utilisation de BWB Technologies, pour mesurer les émissions de potassium. Nébulisez les solutions standard de travail au lithium et ajustez les commandes jusqu'à l'obtention de lectures constantes de zéro et maximales. Nébulisez les solutions étalons de travail intermédiaires et construisez un graphique reliant les données d'émission brutes (appelées RAW in  BWB le photomètre à flamme) à la concentration de toutes les solutions étalons.

 

1 Itzhaki, R., 'Estimation du calcium dans la désoxyribonucléoprotéine et l'acide désoxyribonucléique par photométrie de flamme', Anal. Biochimie. 33, (1970), p.76-86

bottom of page