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Mesure du calcium
dans Sérum et urine 
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Cette méthode réduit ou supprime les interférences potentielles du sodium, du potassium et des phosphates normalement présents dans le sérum et l'urine en diluant les échantillons avec un diluant contenant de l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA). 

 

Une solution d'EDTA est préparée pour annuler l'interférence des espèces ioniques concurrentes lors de la détermination du Calcium / Sodium / Potassium par photométrie de flamme. Pour annuler la formation de phosphate de calcium dans les échantillons qui empêche l'émission d'ions calcium en solution, une solution de 1000 mg/L est ajoutée en raison de son potentiel de liaison plus élevé avec les phosphates présents dans le sérum et l'urine.

Réactifs

Une solution mère d'EDTA a été préparée avec 58,4 grammes d'EDTA dilués dans 400 ml d'eau DI. A cette solution, de petites aliquotes d'hydroxyde d'ammonium ont été ajoutées et le pH de la solution a été testé avec une sonde de pH jusqu'à ce que les additions amènent le pH de la solution à 8,0. Cette solution a ensuite été filtrée dans une fiole jaugée de 1 litre à travers du papier filtre Whatman N.5 et diluée à 1 litre avec de l'eau DI.

 

Une gamme d'étalons a ensuite été formée dans 5 fioles jaugées avec les concentrations ioniques suivantes :

Na(mmol/L) 0, 50, 100, 150, 200

K(mmol/L) 0, 10, 20, 30, 40, 50

Ca(mmol/L) 0, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0

 

En plus de ces ions d'étalonnage, 0,75 mMol/L de Mg a été maintenu dans chaque étalon pour la mesure du sang et 0,125 mg/L de Mg pour la mesure de l'urine, avec 1 ml de solution de chlorure de lanthane à 1 000 mg/L ajouté pour tenir compte de son ajout à chaque échantillon.

Procédure

2 ml de l'échantillon, qu'il s'agisse de sérum ou d'urine, ont été placés dans une fiole jaugée en polyéthylène. Dans cette fiole jaugée, 1 ml de solution de chlorure de lanthane à 1000 mg/L a été ajouté, puis la solution a été diluée à 100 ml avec la solution d'EDTA pour diluer l'échantillon cinquante fois. La fiole jaugée a ensuite été mélangée par inversion.

La solution a ensuite été étiquetée et mise de côté pendant que le photomètre de flamme est calibré.

 

Le photomètre de flamme a été allumé et laissé se stabiliser pendant 45 minutes avant l'étalonnage.

Les solutions standard préparées ont ensuite été aspirées conformément aux directives énoncées dans les directives MultiPoint/Multi Ion énoncées dans le manuel d'installation et d'utilisation de BWB-Tech. Pour éviter que des résidus à haute concentration n'affectent la série d'étalonnage, tous les ions à plus faible concentration ont été initialement étalonnés (par exemple, étalonner tous les ions étalons à faible concentration avant de passer à la solution d'étalonnage suivante).

 

Le photomètre à flamme a ensuite été mis en mode lecture et l'échantillon a été aspiré; le résultat de cette détermination a été multiplié par 50 pour tenir compte de la dilution de 50 fois effectuée dans l'étape de préparation de l'échantillon de cette méthodologie.

 

Préparation du graphique standard

Réglez le photomètre de flamme conformément à l'étalonnage multipoint/un seul ion figurant à la page 24 du manuel d'installation et d'utilisation de BWB Technologies, pour mesurer les émissions de potassium. Nébulisez les solutions standard de travail au lithium et ajustez les commandes jusqu'à l'obtention de lectures constantes de zéro et maximales. Nébulisez les solutions étalons de travail intermédiaires et construisez un graphique reliant les données d'émission brutes (appelées RAW in  BWB le photomètre à flamme) à la concentration de toutes les solutions étalons.

1 Thiers, R. et Hviid, K., 'Photométrie sans interférence du calcium dans le sérum et l'urine',  Clin.Chem., 8, (1962) , p. 35-46.

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