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Mesure du potassium
dans Feuilles de plantes non cendrées 
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Cette procédure utilise une extraction au TCA (acide trichloracétique) du tissu pour libérer tout le calcium.

 

Il a été constaté qu'il n'y avait pas d'interférence significative
du sodium, du potassium ou du phosphate présent dans un
échantillon à des niveaux physiologiques normaux. La concentration en calcium dans la plage de 0,5 à 3,0 μg Ca / 100 mg d'échantillon est facilement déterminée.    
 

Procédure

Préparation de la solution et de l'étalon
De l'eau distillée déminéralisée est utilisée pour préparer les solutions suivantes : 

 

Fluide de dilution organique contenant 500 ml d'alcool isopropylique, 300 ml d'eau, 0,2 ml Non-Ion-Ox (ex. Aloe Scientific Co., St. Louis, Mo. USA), 74,6 mg de KCl et 292 mg de NaCl La solution de . TCA pour l'extraction tissulaire était à 6,2 % p/v et pour la préparation standard à 8,3 % p/v et contenait également 19,5 mg de NaCl / 100 ml.

 

Une solution d'acide trichloracétique à 6,25 % est d'abord préparée. Pour ce faire, pesez précisément 6,25g d'acide trichloroacétique et ajoutez-le dans une fiole jaugée de 100ml, puis complétez au trait avec de l'eau déionisée ou milliq. Pour constituer une solution de TCA à 8,3 % p/v, 8,3 g de TCA ont été dissous de la même manière.

 

La solution standard de calcium primaire a été préparée en dissolvant 250 mg de CaCO3 dans 25 ml of 2M HCl et diluée à 1 l pour donner 100 μg de Ca/ml Standards et blancs réactifs contenant 0 à 3 μg Ca /ml ont été préparés en mélangeant 80ml de fluide de dilution organique, 15ml of 8.3% TCA, 0 - 3ml de solution de calcium primaire et de l'eau déminéralisée jusqu'à un volume final de 100ml._cc781905-5cde-3194-bb3b -136bad5cf58d_Lors de l'exécution de l'analyse et de l'étalonnage, vous serez invité à analyser ou à ignorer l'analyse du blanc avant l'étalonnage et la mesure de l'échantillon. Le fluide de dilution organique préparé précédemment doit servir de blanc pour cette analyse.

 

Extraction de tissus

Préparez une tranche de tissu d'environ 0,5 mm d'épaisseur. Trempez rapidement la tranche de tissu dans une solution d'incubation sans calcium et épongez soigneusement sur du papier filtre. Pesez avec précision pour obtenir des échantillons d'un poids humide de l'ordre de 100 mg.

 

Transférer l'échantillon dans un tube à centrifuger, ajouter suffisamment de TCA à 6,2 % pour obtenir un volume de 2 ml. Agiter vigoureusement le tube 3 fois sur une période de 30 minutes.   _cc781905-5cde-bb_31954-bb_bad654

 

Ajouter un volume de 8 ml de Fluide de Dilution Organique dans le tube et centrifuger. Le surnageant est analysé directement. 

 

Préparation du graphique standard

Réglez le photomètre de flamme conformément à l'étalonnage multipoint/un seul ion figurant à la page 24 du manuel d'installation et d'utilisation de BWB Technologies, pour mesurer les émissions de potassium. Nébulisez les solutions standard de travail et ajustez les commandes jusqu'à ce que des lectures constantes de zéro et maximales soient obtenues. Nébulisez les solutions étalons de travail intermédiaires et construisez un graphique reliant les données d'émission brutes (appelées RAW in  BWB le photomètre à flamme) à la concentration de toutes les solutions étalons.

1 Geyer, RP et Bowie, EJ, 'La microdétermination directe du calcium tissulaire par photométrie de flamme', Anal. Biochem., 2, (1961), 360-369.

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