Medição de cálcio
em Amostras Biológicas1

Vários métodos têm sido relatados para a medição de
cálcio em materiais biológicos por
fotometria de chama ou titulação.

 

Este método emprega ácido tricloroacético (TCA)
para precipitar as proteínas e foi encontrado para ser
adequado para extrair todo o cálcio das amostras de tecido.   Sódio, potássio e fosfato não causaram interferência significativa e a concentração de cálcio na faixa de 0 a 2 µg/ml é prontamente determinada. _cc781905-5cde- 3194-bb3b-136bad5cf58d_ 

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Soluções

Água destilada deionizada é usada por toda parte.  Diluting Solutions é 500 ml de álcool isopropílico, 300 ml de água deionizada, 0,2 ml de Non-Ion-Ox (Aloe Scientific Co, St. Louis, Mo.), 74,6 mg de KCl e 292 mg de NaCl. A solução de ácido tricloroacético é 6,2% p/v para extração de tecido.  

 

Procedimento   

Amostras de tecido foram preparadas e cuidadosamente borradas em papel de filtro, depois pesadas com precisão para produzir amostras na faixa de 100 mg de peso úmido. 136bad5cf58d_ 

 

A amostra é transferida para um pequeno tubo de centrifugação e são adicionadas soluções de TCA a 6,2% suficientes para levar o volume a 2 ml. O tubo é bem coberto e agitado vigorosamente três vezes ao longo de um período de trinta minutos.

 

Um volume de 8 ml de fluido de diluição é adicionado ao tubo de centrifugação e o tubo é centrifugado. A solução sobrenadante pode ser analisada diretamente sem diluição adicional. 

 

Ao medir amostras, deve ser realizado um teste inicial para estimar a faixa de concentração de cálcio por meio de uma calibração de ponto único de 100 ppm. Com o valor estimado da concentração da amostra, os padrões devem ser compostos de pelo menos 4 padrões cobrindo ± 50 ppm do valor aproximado da amostra.

 

Ao produzir soluções padrão é de vital importância que elas sejam diluídas na Solução Diluente e a Solução Diluente deve ser processada como um branco para que o fotômetro de chama leve em conta as interferências químicas na matriz, bem como a influência do álcool isopropílico presente na A chama.

 

Concentrações fisiológicas normais de sódio, potássio e fosfato não causaram interferências significativas.  No entanto, os métodos para reduzir a interferência química encontrada a partir deles podem ser evitados por métodos que utilizam EDTA, encontrados em Medição de cálcio no soro e Urina. A interferência de fosfato também pode ser reduzida aumentando a temperatura da chama e foram propostos métodos para a adição de pequenas quantidades de lantânio e estrôncio, no entanto, a extensão pela qual a interferência é reduzida não é atualmente quantificada.