Medição de cálcio
em DNA e DNP 1

O teor de cálcio do aquoso
soluções de ácido desoxirribonucleico (DNA) e desoxirribonucleoproteína (DNP) não podem ser testadas diretamente devido a efeitos de interferência.  

 

Um procedimento de extração ácida permitirá medições diretas de cálcio no DNA e DNP, ou uma técnica de adição padrão é usada em concentrações mais altas.     

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Procedimento
Água destilada deionizada é usada por toda parte.  Os copos são limpos com ácido e enxaguados completamente em água deionizada antes do uso para evitar contaminação.  3194-bb3b-136bad5cf58d

 

Extração ácida

Os extratos ácidos são preparados adicionando 1 volume de HCl 1 M a 19 volumes de solução de amostra contendo DNA ou DNP em água e deixados a 700 ° C durante a noite.   Quando uma suspensão estiver presente, a amostra é centrifugada a 2000G por 10 minutos para obter a fração solúvel. Cerca de 99% do DNA e cerca de 80% da proteína torna-se solúvel em HCl após ficar durante a noite em HCl. A concentração de DNA de DNP é de aproximadamente 40% p/p. 

 

A solução de amostra deve ter uma concentração de DNA entre 50ppm e 100ppm de DNA. Portanto, deve-se notar que as leituras podem causar falta de estabilidade se as concentrações de íons estiverem presentes acima de 100 ppm. Embora o fotômetro de chama seja capaz de detectar leituras de íons acima de 100 ppm, não é recomendado. Isto é devido à matéria que pode ser depositada no nebulizador e efetuar outras medições pelas gotículas que saem durante outras medições. Isto significa que a frequência com que o nebulizador necessita de limpeza é aumentada e recomenda-se uma diluição adicional da amostra.

 

Técnica de adição padrão

A técnica de adição padrão é um meio de estimar a concentração em uma solução onde também se sabe que metais interferentes estão presentes.  

 

A técnica mede a recuperação de quantidades conhecidas adicionadas à concentração de solução desconhecida. As soluções de amostra são preparadas adicionando 1 ou 2 ml aliquots de solução de amostra a uma solução padrão de cálcio. 

 

A concentração de cálcio da solução da amostra original é calculada plotando a concentração da solução padrão e a solução padrão mais a amostra; a diferença menos o branco de HCl para cada curva traçada será a concentração da solução desconhecida.

 

Preparação do gráfico padrão

Configure o fotômetro de chama de acordo com a Calibração MultiPoint/Single Ion encontrada na página 24 do Manual de Instalação e Operação da BWB Technologies, para medir a emissão de potássio. Nebulize as soluções padrão de trabalho de lítio e ajuste os controles até obter o zero constante e as leituras máximas. Nebulize as soluções padrão de trabalho intermediárias e construa um gráfico relacionando os dados brutos de emissão (conhecido como RAW in  BWB o fotômetro de chama) à concentração de todas as soluções padrão.