Medição de cálcio
em Soro e Urina 1

Este método reduz ou remove a interferência potencial de sódio, potássio e fosfatos normalmente presentes no soro e na urina diluindo as amostras com um diluente contendo ácido etilenodiaminotetracético (EDTA). 

 

Não houve efeito da presença de proteínas dissolvidas no sinal de cálcio; a proteína permanece em solução quando o soro é diluído com ≤0,15M EDTA. Prepared amostras diluídas continham 0,1-0,3mEq/l
de cálcio na urina e 1-3 mM/l no soro, com uma precisão de ± 0,1 mEq/l .   

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Reagentes
Solução estoque de EDTA: uma solução 0,2 M do sal de amônio de EDTA em pH 8,0 é preparada colocando 58,4 g de EDTA em um béquer de 400 ml e adicionando 100 ml de água destilada deionizada.  NH4OH concentrado suficiente é adicionado para dissolver o pó e aumentar o pH para 8. 

 

A solução é filtrada em um balão volumétrico de 1 litro e diluída até o volume com água destilada deionizada. 

 

Soluções estoque padrão foram preparadas sendo estas, cloreto de sódio e cloreto de potássio 1,0 M e cloreto de cálcio e cloreto de magnésio 0,2 M foram preparados a partir de NaCl, KCl, CaCO3 e MgCl cuidadosamente secos.

 

A standard 1.0 M phosphate solution was prepared from NaH2PO4∙H2O. 

 

Soluções de correção de fundo
Diferentes soluções de correção de fundo foram preparadas para diluições de soro e urina a partir de soluções estoque contendo todos os cátions acima, exceto cálcio (ou seja, sódio, potássio, magnésio e fosfato), nas concentrações mostradas.

 

Procedimento

Soluções, padrões e amostras foram diluídos 50 vezes antes da aspiração na chama.   Soro ou urina foram diluídos 50 vezes usando EDTA 0,15M, preparado a partir da Solução Stock de EDTA.

 

Para realizar uma diluição de 50 vezes, adiciona-se 2ml de soro ou urina a um balão volumétrico de 100ml (não se deve usar vidro se for medir Na) e completa-se até a marca.

 

A Solução de Correção de Fundo é usada para zerar o instrumento, pois contém todas as espécies emissoras de luz que se espera que estejam presentes na amostra (exceto aquela a ser medida). Zerar o instrumento requer a execução da Solução de Correção de Fundo como um branco antes da calibração do fotômetro de chama.

 

O fotômetro de chama foi então calibrado usando solução de cloreto de cálcio 0,2 M antes da análise das amostras.

 

Preparação do gráfico padrão

Configure o fotômetro de chama de acordo com a Calibração MultiPoint/Single Ion encontrada na página 24 do Manual de Instalação e Operação da BWB Technologies, para medir a emissão de potássio. Nebulize as soluções padrão de trabalho de lítio e ajuste os controles até obter o zero constante e as leituras máximas. Nebulize as soluções padrão de trabalho intermediárias e construa um gráfico relacionando os dados brutos de emissão (conhecido como RAW in  BWB o fotômetro de chama) à concentração de todas as soluções padrão.