MediciĆ³n de calcio
en muestras biolĆ³gicas1
Se han reportado varios mĆ©todos para la mediciĆ³n de
calcio en materiales biolĆ³gicos por
fotometrĆa de llama o titulaciĆ³n.
Este mƩtodo emplea Ɣcido tricloroacƩtico (TCA)
para precipitar las proteĆnas y se ha encontrado que es
adecuado para extraer todo el calcio de las muestras de tejido. El sodio, el potasio y el fosfato no causaron interferencia significativa y la concentraciĆ³n de calcio en el rango de 0 a 2 Āµg/ml se determina fĆ”cilmente._cc781905-5cde- 3194-bb3b-136bad5cf58d_
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Soluciones
Se utiliza agua destilada desionizada en todo el proceso. Diluting Solutions es 500 ml de alcohol isopropĆlico, 300 ml de agua desionizada, 0,2 ml de Non-Ion-Ox (Aloe Scientific Co, St. Louis, Mo.), 74,6 mg de KCl y 292 mg NaCl. La soluciĆ³n de Ć”cido tricloroacĆ©tico es 6,2 % p/v para la extracciĆ³n de tejidos.
Procedimiento
Las muestras de tejido se prepararon y se secaron cuidadosamente en papel de filtro, luego se pesaron con precisiĆ³n para producir muestras en el rango de 100 mg de peso hĆŗmedo. 136bad5cf58d_
La muestra se transfiere a un pequeƱo tubo de centrĆfuga y se aƱaden suficientes soluciones de TCA al 6,2 % para llevar el volumen a 2 ml. El tubo se tapa hermĆ©ticamente y se agita vigorosamente tres veces durante un perĆodo de treinta minutos.
Se aƱade un volumen de 8 ml de lĆquido de diluciĆ³n al tubo de centrĆfuga y se centrifuga el tubo. La soluciĆ³n sobrenadante se puede analizar directamente sin diluciĆ³n adicional.
Al medir muestras, se debe realizar una prueba inicial para estimar el rango de concentraciĆ³n de calcio a travĆ©s de una calibraciĆ³n de un solo punto de 100 ppm. Con el valor estimado de la concentraciĆ³n de la muestra, los estĆ”ndares deben estar formados por al menos 4 estĆ”ndares que cubran Ā±50 ppm del valor de muestra guĆa aproximado.
Al producir soluciones estĆ”ndar, es de vital importancia que se diluyan en la SoluciĆ³n de diluciĆ³n y la SoluciĆ³n de diluciĆ³n se debe ejecutar como un blanco para que el fotĆ³metro de llama tenga en cuenta las interferencias quĆmicas en la matriz, asĆ como la influencia del alcohol isopropĆlico presente en la llama.
No se encontrĆ³ que las concentraciones fisiolĆ³gicas normales de sodio, potasio y fosfato causaran interferencias significativas. Sin embargo, los mĆ©todos para reducir la interferencia quĆmica encontrada a partir de estos podrĆan evitarse mediante mĆ©todos que utilizan EDTA, que se encuentran en MediciĆ³n de calcio en suero y orina. La interferencia de fosfato tambiĆ©n se puede reducir aumentando la temperatura de la llama y se han propuesto mĆ©todos que agregan cantidades traza de lantano y estroncio, sin embargo, actualmente no se cuantifica la medida en que se reduce la interferencia.
1Geyer, Robert & Bowie, E.'La microdeterminaciĆ³n directa del calcio tisular
por Flame Photometry', Anal Biochem, 2, (1961), p. 360-369.