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Medición de calcio
en muestras biológicas
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Se han reportado varios métodos para la medición de
calcio en materiales biológicos por
fotometría de llama o titulación.

 

Este método emplea ácido tricloroacético (TCA)
para precipitar las proteínas y se ha encontrado que es
adecuado para extraer todo el calcio de las muestras de tejido.  El sodio, el potasio y el fosfato no causaron interferencia significativa y la concentración de calcio en el rango de 0 a 2 µg/ml se determina fácilmente._cc781905-5cde- 3194-bb3b-136bad5cf58d_
 

Soluciones

Se utiliza agua destilada desionizada en todo el proceso. Diluting Solutions es 500 ml de alcohol isopropílico, 300 ml de agua desionizada, 0,2 ml de Non-Ion-Ox (Aloe Scientific Co, St. Louis, Mo.), 74,6 mg de KCl y 292 mg NaCl. La solución de ácido tricloroacético es 6,2 % p/v para la extracción de tejidos.  

 

Procedimiento   

Las muestras de tejido se prepararon y se secaron cuidadosamente en papel de filtro, luego se pesaron con precisión para producir muestras en el rango de 100 mg de peso húmedo. 136bad5cf58d_ 

 

La muestra se transfiere a un pequeño tubo de centrífuga y se añaden suficientes soluciones de TCA al 6,2 % para llevar el volumen a 2 ml. El tubo se tapa herméticamente y se agita vigorosamente tres veces durante un período de treinta minutos.

 

Se añade un volumen de 8 ml de líquido de dilución al tubo de centrífuga y se centrifuga el tubo. La solución sobrenadante se puede analizar directamente sin dilución adicional. 

 

Al medir muestras, se debe realizar una prueba inicial para estimar el rango de concentración de calcio a través de una calibración de un solo punto de 100 ppm. Con el valor estimado de la concentración de la muestra, los estándares deben estar formados por al menos 4 estándares que cubran ±50 ppm del valor de muestra guía aproximado.

 

Al producir soluciones estándar, es de vital importancia que se diluyan en la Solución de dilución y la Solución de dilución se debe ejecutar como un blanco para que el fotómetro de llama tenga en cuenta las interferencias químicas en la matriz, así como la influencia del alcohol isopropílico presente en la llama.

 

No se encontró que las concentraciones fisiológicas normales de sodio, potasio y fosfato causaran interferencias significativas. Sin embargo, los métodos para reducir la interferencia química encontrada a partir de estos podrían evitarse mediante métodos que utilizan EDTA, que se encuentran en Medición de calcio en suero y orina. La interferencia de fosfato también se puede reducir aumentando la temperatura de la llama y se han propuesto métodos que agregan cantidades traza de lantano y estroncio, sin embargo, actualmente no se cuantifica la medida en que se reduce la interferencia.

1Geyer, Robert & Bowie, E.'La microdeterminación directa del calcio tisular
por Flame Photometry', Anal Biochem, 2, (1961), p. 360-369.

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