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Medición de calcio
en ADN y DNP 
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El contenido de calcio de las aguas
Las soluciones de ácido desoxirribonucleico (ADN) y desoxirribonucleoproteína (DNP) no se pueden analizar directamente debido a los efectos de interferencia.

 

Un procedimiento de extracción con ácido permitirá mediciones directas de calcio en ADN y DNP, o se utiliza una técnica de adición estándar a concentraciones más altas.     

Procedimiento
Se usa agua destilada desionizada en todo el proceso. La cristalería se limpia con ácido y se enjuaga completamente con agua desionizada antes de usar para evitar la contaminación. _cc781905-5cde-3194-bb3b-536dbad5cf

 

Extracción de ácido

Los extractos ácidos se preparan añadiendo 1 volumen de HCl 1 M a 19 volúmenes de solución de muestra que contiene ADN o DNP en agua y se dejan reposar a 700 °C durante la noche.  Cuando hay una suspensión, la muestra se centrifuga a 2000G durante 10 minutos para obtener la fracción soluble. Alrededor del 99 % del ADN y alrededor del 80 % de la proteína se vuelven solubles en HCl después de permanecer durante la noche en HCl. La concentración de ADN de DNP es de aproximadamente 40 % p/p. 

 

La solución de muestra debe tener una concentración de ADN entre 50 ppm y 100 ppm de ADN. Por lo tanto, debe tenerse en cuenta que las lecturas pueden causar una falta de estabilidad si las concentraciones de iones están presentes por encima de 100 ppm. Si bien el fotómetro de llama puede detectar lecturas de iones superiores a 100 ppm, no se recomienda. Esto se debe a la materia que puede depositarse en el nebulizador y efectuar otras mediciones por las gotitas que salen durante otras mediciones. Esto significa que se aumenta la frecuencia con la que el nebulizador requiere limpieza y se recomienda una mayor dilución de la muestra.

 

Técnica de suma estándar

La técnica de adición estándar es un medio para estimar la concentración en una solución donde también se sabe que hay metales que interfieren. 

 

La técnica mide la recuperación de cantidades conocidas añadidas a la concentración de solución desconocida. Las soluciones de muestra se preparan agregando 1 o 2 ml alcuotas de solución de muestra a una solución estándar de calcio. 

 

La concentración de calcio de la solución de muestra original se calcula trazando la concentración de la solución estándar y la solución estándar más la muestra; la diferencia menos el blanco de HCl para cada curva trazada será la concentración de la solución desconocida.

 

Preparación de gráfico estándar

Configure el fotómetro de llama de acuerdo con la Calibración multipunto/de un solo ion que se encuentra en la página 24 del Manual de instalación y operación de BWB Technologies, para medir la emisión de potasio. Nebulice las soluciones estándar de trabajo de litio y ajuste los controles hasta que se obtengan lecturas constantes de cero y máximas. Nebulice las soluciones estándar de trabajo intermedias y construya un gráfico que relacione los datos de emisión sin procesar (conocidos como RAW en  BWB el fotómetro de llama) con la concentración de todas las soluciones estándar.

 

1 Itzhaki, R., 'Estimación de calcio en desoxirribonucleoproteína y ácido desoxirribonucleico mediante fotometría de llama', Anal. Bioquímica 33, (1970), págs. 76-86

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