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MediciĆ³n de potasio
en Hojas de plantas sueltas 
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Este procedimiento utiliza una extracciĆ³n del tejido con TCA (Ć”cido tricloroacĆ©tico) para liberar todo el calcio.

 

Se encontrĆ³ que no hubo interferencia significativa.
del sodio, potasio o fosfato presente en un
muestra a niveles fisiolĆ³gicos normales. La concentraciĆ³n de calcio en el rango de 0,5 a 3,0 Ī¼g Ca/100 mg de muestra se determina fĆ”cilmente.    
 

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Procedimiento

PreparaciĆ³n de soluciones y estĆ”ndares
Se utiliza agua destilada desionizada para preparar las siguientes soluciones: 

 

LĆ­quido diluyente orgĆ”nico que contiene 500 ml de alcohol isopropĆ­lico, 300 ml de agua, 0,2 ml Non-Ion-Ox (ex. Aloe Scientific Co., St. Louis, Missouri, EE. UU.), 74,6 mg de KCl y 292 mg de NaCl . TCA para la extracciĆ³n de tejido fue del 6,2 % p/v y para la preparaciĆ³n estĆ”ndar fue del 8,3 % p/v y tambiĆ©n contenĆ­a 19,5 mg de NaCl/100 ml.

 

Primero se prepara una soluciĆ³n de Ć”cido tricloroacĆ©tico al 6,25%. Para hacer esto, pese con precisiĆ³n 6,25 g de Ć”cido tricloroacĆ©tico y agrĆ©guelos a un matraz volumĆ©trico de 100 ml, luego enrase con agua desionizada o miliq. Para completar la soluciĆ³n de TCA al 8,3% p/v, se disolvieron 8,3 g de TCA de la misma manera.

 

La soluciĆ³n estĆ”ndar de calcio primario se preparĆ³ disolviendo 250 mg de CaCO3 en 25 ml de HCl 2 M y se diluyĆ³ a 1 l para dar 100 Ī¼g Ca / ml EstĆ”ndares y blancos de reactivo que contenĆ­an 0 ā€“ Ī¼g Ca/ml se prepararon mezclando 80 ml de lĆ­quido diluyente orgĆ”nico, 15 ml de TCA al 8,3 %, 0 ā€“ 3 ml de soluciĆ³n primaria de calcio y agua desionizada hasta un volumen final de 100 ml._cc781905-5cde-3194-bb3b -136bad5cf58d_Al realizar el anĆ”lisis y la calibraciĆ³n, se le pedirĆ” que analice u omita el anĆ”lisis en blanco antes de la calibraciĆ³n y la mediciĆ³n de la muestra. El fluido de diluciĆ³n orgĆ”nico preparado previamente debe ejecutarse como blanco para este anĆ”lisis.

 

ExtracciĆ³n de tejido

Prepare una rebanada de tejido de aproximadamente 0,5 mm de espesor. Sumergir rĆ”pidamente la rebanada de tejido en una soluciĆ³n de incubaciĆ³n sin calcio y secar con cuidado en papel de filtro. Accurately weigh, to yield samples in the range of 100 mg wet weight.    

 

Transfiera la muestra al tubo de centrƭfuga, agregue suficiente TCA al 6,2 % para obtener un volumen de 2 ml. Agite enƩrgicamente el tubo 3 veces durante un perƭodo de 30 minutos.

 

AƱadir un volumen de 8 ml de lĆ­quido diluyente orgĆ”nico al tubo y centrifugar. El sobrenadante se analiza directamente. 

 

PreparaciĆ³n de grĆ”fico estĆ”ndar

Configure el fotĆ³metro de llama de acuerdo con la CalibraciĆ³n multipunto/de un solo ion que se encuentra en la pĆ”gina 24 del Manual de instalaciĆ³n y operaciĆ³n de BWB Technologies, para medir la emisiĆ³n de potasio. Nebulice las soluciones estĆ”ndar de trabajo y ajuste los controles hasta que se obtengan lecturas constantes de cero y mĆ”ximas. Nebulice las soluciones estĆ”ndar de trabajo intermedias y construya un grĆ”fico que relacione los datos de emisiĆ³n sin procesar (conocidos como RAW en  BWB el fotĆ³metro de llama) con la concentraciĆ³n de todas las soluciones estĆ”ndar.

1 Geyer, RP y Bowie, EJ, 'La microdeterminaciĆ³n directa del calcio tisular por fotometrĆ­a de llama', Anal. Biochem., 2, (1961), 360-369.

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